人CD14+细胞分离试剂盒（正选）
91-01-0012
产品简介
本产品能够从新鲜或冻存的外周血单个核细胞中简便快捷的分选出高纯度的CD14+细胞。能够处理的总细胞量为1×109，可为基础和临床研究使用CD14+细胞提供一个有力的武器。
预期用途
适用于从人外周血、浓缩白细胞来源的单个核细胞中分选出CD14+细胞。
产品信息
中文名称 | 人CD14+细胞分离试剂盒（正选） |
英文名称 | Human CD14+ cell isolation kit（positive selection） |
货号 | 91-01-0012 |
细胞处理量 | 用于处理1×109个细胞 |
分选方法 | 正选 |
试剂盒组成
成分名称 | 物理性状 | 规格 | 数量 |
生物素化人CD14抗体 | 无色透明液体 | 1mL/支 | 2支 |
链霉亲和素磁珠 | 棕色混悬液 | 1mL/支 | 1支 |
细胞分选缓冲液 | 无色透明液体 | 500mL/瓶 | 1瓶 |
保存方式
生物素化人CD14抗体，链霉亲和素磁珠及细胞分选缓冲液均置于2-8°C保存，有效期为12个月；生产日期，有效期至：见标签。
操作步骤
1、 单个核细胞的提取
分离外周血单个核细胞(推荐欣协生物快速单个核细胞分离管，货号91-01-0002),详细使用方法参见单个核细胞分离管说明书。
2、 CD14+细胞分离
注意：整个细胞分离过程可大致分为PBMC细胞密度调整-生物素化抗体孵育-洗涤-磁珠孵育-磁吸等步骤，其中生物素化抗体孵育在离心管操作即可，磁珠的孵育与磁吸等则转移至流式管中操作。
1 调整细胞密度：将欲操作的PBMC细胞浓度调整为1×108cells/mL；
注意：
1）若PBMC为冻存细胞，可直接用预冷的细胞分选缓冲液复苏洗涤；若PBMC为新鲜提取的细胞，则可在PBMC提取的后一步洗涤操作中用细胞分选缓冲液洗涤；
2）若所要分离的细胞数量过少，例如只有1×107cells，则可将细胞密度调整为5×107cells/mL。
2 生物素化抗体孵育：将生物素化抗体以200uL抗体/1×108初始PBMC的比例将加入细胞悬液中，迅速用移液枪轻柔吹打，充分混合后置于4°C孵育15min；
3 洗涤：孵育完毕后，加入细胞分选缓冲液，300g离心10min后，弃上清，加入一定量的细胞分选缓冲液，使细胞悬液体积回复到初始时的水平；
注意：弃上清时，往往在管口处残留些许缓冲液，尽可能将这些残留液用移液枪等吸取干净，必要时可再次用缓冲液洗涤，避免残留液中的部分抗体成分对后续的磁珠与细胞的结合产生干扰。
4 磁珠孵育：将细胞悬液转移至流式管，以100uL磁珠/1×108初始PBMC的比例将链霉亲和素磁珠加入到PBMC中，迅速用移液枪轻柔吹打均匀，4°C孵育10min；
注意：磁珠吸取前需将磁珠溶液充分振荡或吹吸均匀。
5 磁吸：孵育完毕后，加入分选缓冲液至2.5mL，轻柔吹打均匀，将流式管置于磁极中，磁吸3min，手握磁极倾倒液体，倾倒出的液体为不含CD14+细胞的细胞悬液；
注意：倾倒液体时，速度不可过快，避免造成过快的液体流速冲刷出已磁吸在管壁的细胞。
6 再次磁吸：加入与第5步同体积的细胞分选缓冲液，轻柔吹散磁珠后再次磁吸3min，吸弃或收集未磁吸的细胞；
注意：
1）多次磁吸洗涤可提高CD14+细胞的纯度；
2）若目的为收集非CD14+细胞，则需要合并多次磁吸洗涤过程中的未磁吸细胞悬液。
7 所得磁吸细胞即为CD14+细胞。
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