新品丨欣协生物宿主细胞残留DNA样本前处理试剂盒(磁珠法)
日期：2023-06-25 阅读：
宿主细胞残留DNA样本前处理试剂盒(磁珠法)
本试剂盒用于生物制品样本前处理，精准抽提各种生物制品中宿主细胞残留 DNA。适用于多种基质缓冲溶液，有效提取纯化微量的DNA。可与欣协生物宿主细胞(CHO、E.coli、Vero、SV40LTA&EIA等)DNA(qPCR)检测试剂盒配合使用。
订购信息
产品组分
运输与保存
蓝冰运输。规定储存条件下12个月。
试验所需自备器材和试剂
无水乙醇(分析纯)
1×PBS缓冲液(无Mg2+和Ca2+，除菌过滤)
异丙醇(分析纯)
涡旋仪
磁力架
离心机
水浴锅/金属浴
移液器
1.5mL无菌低吸附离心管
低吸附吸头
一次性手套
试验流程
试验准备
1、每次试验需要在干净的试剂瓶中用无水乙醇和灭菌过的超纯水配制成新鲜的80%乙醇。
2、单个样本的结合液的准备：9μL糖原+0.2μL酵母tRNA(如果提取酵母 DNA，结合液中不加酵母tRNA)。注：单次吸液量不少于3μL。
3、洗涤液准备：洗涤液使用前加30mL的无水乙醇，充分混匀后使用，同时做好标记，每次使用后将瓶盖盖紧，以保持瓶中的无水乙醇含量。
样本准备
1、样本稀释：如果待检测样本是生物制品纯化过程中的上游中间样本，可能含有较高的DNA含量。为了保证检测的准确性，使样本的检测值在标准曲线线性范围之内，可以用1×PBS对高DNA含量样本进行适当比例稀释后再进行样本提取，一般可考虑将高DNA含量样本稀释100倍或1000倍。
2、干粉样本：一般可考虑将干粉样本稀释成10mg/mL或100mg/mL，再进行提取操作。
3、pH值要求：使用氢氧化钠或盐酸调整样品的pH至中性(pH6.0~8.0)进行提取。
4、平行处理：每个样本建议进行三次DNA提取处理。
5、样品加标：待处理样品的DNA加标浓度为样品核酸浓度的2-10倍为宜，建议样品加标体积不超过待处理样本体积的1/10。
6、阴性对照：每次试验需用无模板稀释液(1×PBS)与待测样本一同处理。
操作流程
1、每个待处理样本取100μL于1.5mL离心管中，待进一步提取。
2、每个100μL样本中加入25μL裂解液和10μL蛋白酶K，涡旋震荡30s，瞬时离心，65℃孵育15min。
提取步骤
1、孵育完成后将离心管瞬时离心，之后依次加入9.2μL结合液、50μL裂解液和150μL异丙醇，20μL磁珠(磁珠使用前需充分混匀，确保每次加入的磁珠量均一致，以免造成DNA得率不一致)，涡旋振荡5min,快速离心10s。
2、将离心管置于磁力架，轻轻地左右转动，待磁珠聚集于贴近磁力架的管壁后，保持离心管固定于磁力架上，用移液枪吸去上清，注意不要触碰磁珠。
3、加入500μL洗涤液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，涡旋振荡 30s，确保磁珠分散，离心管壁无聚集磁珠。快速离心10s后将离心管重新置于磁力架上轻轻地左右转动，待磁珠聚集于贴近磁力架的管壁后，静置 1min，用移液器小心吸去上清。
4、加入500μL新鲜配制的80%乙醇，涡旋振荡30s，确保磁珠分散，离心管壁无聚集磁珠。快速离心10s后将离心管重新置于磁力架上轻轻地左右转动，待磁珠聚集于贴近磁力架的管壁后，静置1min，用移液器小心吸去上清。
5、为保证尽量吸出残留乙醇，可将离心管快速离心10s后，置于磁力架上用10μL移液器吸出残留乙醇。
6、打开管盖室温干燥3-5min(干燥时间依具体情况进行延长或缩短；肉眼随时注意观察，避免磁珠过分干燥)。
注：干燥过程中磁珠过干或有乙醇残留都会影响样本回收率。干燥也可选择鼓风干燥，一般建议鼓风干燥2min。
7、将离心管从磁力架取下，每管加入100μL洗脱液，涡旋振荡1min，70℃孵育7min，期间每2-3min涡旋混匀一次。
8、孵育完成后，将离心管高速离心1min，然后静置于磁力架上，待磁珠分离后，用移液器小心转移上清到新的1.5mL离心管中。
注意事项
1、实验开始前，为减少污染建议用酒精擦拭台面、移液器、枪头盒等表面。
2、注意在不同加样步骤间及时更换吸头，避免交叉污染。
3、所有试剂需平衡至室温，再进行实验。
4、在磁珠洗涤或洗脱过程中，每次振荡混匀后，都要短时间快速离心，以保证没有磁珠液附着在离心管管盖和管壁上。
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