新品丨欣协生物Rat CRP ELISA 试剂盒
日期：2023-06-09 阅读：
欣协生物生产地Rat CRP ELISA检测试剂盒是用于定量检测大鼠血清、血浆或细胞培养上清液等样本中 CRP的专用试剂盒，本试剂盒操作方便简单，可直接用于样本分析，重现性好，稳定性高。
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检测原理
本实验采用双抗体夹心ELISA。用抗大鼠CRP单克隆抗体预包被酶标板，加入适度稀释的样本和标准品，其中的CRP会与其单抗结合，洗去游离成分；加入生物素化的抗大鼠CRP抗体，抗大鼠CRP抗体与结合在单抗上的大鼠CRP结合而形成免疫复合物，洗去游离的成分；加入辣根过氧化物酶标记的亲合素，生物素与亲合素特异性结合，洗去未结合的酶结合物；加入显色剂，若反应孔中有CRP，辣根过氧化物酶会使无色的显色剂现蓝色；加终止液变黄。在450nm下测OD值，CRP浓度与OD450值之间呈正比，可通过绘制标准曲线 计算出标本中CRP浓度。
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其他材料
1、酶标仪(450nm)
2、高精度可调移液器及吸头: 0.5-10, 2-20, 20-200, 200-1000μl; 一次检测样品较多时，好用多通道移液器
3、自动洗板机或洗瓶
4、37℃温箱
5、双蒸水或去离子水、吸水纸、量筒
样本处理及保存方法
血清：使用不含热原和内毒素的试管，收集血液后，室温凝血30min，1000×g离心10min，小心分离血清。
血浆：用EDTA、柠檬酸盐、肝素作为抗凝剂收集血浆，收集后30min内以1000×g离心15min去除颗粒。
细胞上清液：1000×g离心10min去除颗粒和聚合物。
保存：若样品不立即检测，请将其按一次用量分装，-20℃至-70℃保存，避免反复冻融。尽量避免使用溶血或高血脂样本。如果血清中含有大量颗粒，检测前先离心或过滤去除；室温下解冻，请勿于37℃或更高的温度加热解冻。
稀释：可根据实际情况，将标本做适当倍数稀释(建议做预实验，以确定稀释倍数) 。
注：正常人血清或血浆样本建议做1:2稀释
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操作步骤
1、按照上述准备工作配制好各种溶液。
2、根据待测样品数量和标准品的数量决定所需的板条数，并增加1孔作为空白对照孔。分别将标本和不同浓度 标准品(100μl /孔)加入相应孔中（零孔只加标准品/样本稀释液），用封板胶纸封住反应孔，37℃孵箱孵育90 分钟。
3、洗板4次：(1)自动洗板机：要求注入的洗涤液为350μl，注入与吸出间隔15-30秒。(2)手工洗板：甩尽孔内液 体，每孔加洗涤液350μl，静置30秒后甩尽液体，在厚迭吸水纸上拍干。
4、加入生物素化抗体工作液(100μl /孔)。用封板胶纸封住反应孔，37℃孵箱孵育60分钟。
5、洗板4次。
6、加入酶结合物工作液(100μl /孔)。用封板胶纸封住反应孔，37℃孵箱孵育30分钟。
7、洗板4次。
8、加入显色剂100μl /孔，避光，37℃孵箱孵育8-20分钟。
9、加入终止液100μl /孔，混匀后即刻测量OD450值(5分钟内)。
注：空白对照孔只加显色剂和终止液，如用450nm/630nm双波长读数，无需做空白对照。OD值 =OD450-OD630。
判断结果
1、每个标准品和标本的OD值应减去空白孔的OD值，如果做复孔，求其平均值。
2、使用计算机软件以吸光度OD值为纵坐标(Y)，相应的CRP标准品浓度为横坐标(X)，生成相应的标准曲线（建议用4参数曲线拟合），样品的CRP含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。
3、若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数算标本含量。
4、参考数据：（数据仅供参考，不同用户佳显色时间会有所不同）
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结果重复性
板间，板内变异系数均＜10%。
灵敏度
低检测大鼠CRP剂量小于150pg/ml。低检出量测定方法：20个零标准的平均OD值增加两个标准差，再 计算相应的浓度。
特异性
此试剂盒可检测天然和重组的大鼠CRP，以100ng/ml平行做特异性试验，均不与下列细胞因子及蛋白反应。
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注意事项
1、试剂盒保存在2-8℃，除复溶后的标准品，其它成分不可冷冻。
2、浓缩生物素化抗体(2a)、浓缩酶结合物(3a)装量极少，运输中颠簸和可能的倒置会使液体沾到管壁或瓶盖。使用前请离心处理以使附着于管壁或瓶盖的液体沉积到管底。
3、为避免交叉污染请使用一次性吸头。
4、终止液和显色剂具腐蚀性，避免皮肤及粘膜直接接触，一旦接触到这些液体，请尽快用大量水冲洗。
5、使用干净的塑料容器配制洗涤液，使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6、洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7、不要用其它来源的试剂混合或替代该产品的组分，不同批号的试剂盒组份不能混用，请在有效日期内使用本 产品。
8、在试验中标准品和样本检测时建议作双复孔或三复孔，加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应孔孵育的时 间一样。
9、充分混匀对反应结果尤为重要，好使用微量振荡器(使用低频率进行振荡)。
10、避免操作过程中酶标板干燥，干燥会使酶标板上生物成分迅速失活，影响实验结果。
11、适当的稀释样品，使样品值落在标准曲线范围内，根据待测因子含量高、中、低的不同，建议采用1:100, 1:10, 1:2稀释样品。如果样品OD值高于高标准，适当增加稀释度并重复检测。
12、标准品稀释液、操作人、移液方式、洗涤方法、孵育时间及温度、试剂盒批次的不同均可能会导致结果的差异。
13、此法可有效的消除可溶性受体、结合蛋白以及生物样品中的其他因素的干扰。
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