新品 | 人CD4磁珠分选试剂
日期：2024-12-09 阅读：
产品描述
分选原理
首先，用CD4磁珠对细胞进行磁性标记。然后，将细胞悬液加载到分选柱上，该柱放置在含分选器的磁场中。磁性标记的CD4+细胞被保留在柱内。未标记的细胞贯穿其中，因此，这一细胞部分的细胞被去除。将分选柱从磁场中移除之后，洗脱磁性标记的CD4+细胞作为阳性选择的细胞。
产品信息
使用方法
试剂和设备
●缓冲液:含有pH7.2、0.5%BSA和2mM EDTA的溶液。保持缓冲液冷却状态(2-8℃)。
●分选柱和分选器:CD4+细胞可通过xM、xL柱(阳性选择)进行富集。也可以使用自动分选器进行去除。
●(可选)用于流式细胞术分析的荧光偶联CD4抗体。
●(可选)PI(碘化丙啶)或7-AAD用于流式细胞术排除死亡细胞。
●(可选)预分离过滤器用于去除细胞团块。
一、样本制备
当处理抗凝的外周血液时，应通过密度梯度离心法分离外周血单核细胞(PBMC)。
在处理组织时，用标准的制备方法制备单细胞悬浮液。
二、磁性标记
1.细胞计数。
2.300g离心10min，去除上清。
3.每107细胞，用80μL缓冲液重悬。
4.每107细胞，用20μL CD4磁珠混匀。
5.2-8℃冰箱避光孵育15min。
6.(可选)加入染色抗体，在2-8℃避光孵育5分钟。
7.每107细胞，加入1-2mL缓冲液洗涤，300g离心10min，弃上清。
8.用500μL缓冲液重悬细胞。
三、磁性分选
1.将分选柱放置在分选器的磁场中。
2.将分选柱中加入适量缓冲液，充分湿润分选柱（xM:500μL；xL:3mL）
3.将细胞悬液加到分选柱中。
4.结合磁珠的细胞会被吸附到分选柱上，没有结合的细胞会顺着液体流下来。加适量的缓冲液，待液体全部流尽，再加入适量缓冲液，一共洗3次。收集总流出物。这是未标记的细胞。（xM:3x500μL；xL:3x3mL）
5.将分选柱从分选器中取出，并将其放在合适的收集管上。
6.加适量的缓冲液到分选柱中，迅速用塞子推下，得到就是目的细胞。（xM:1mL；xL:5mL）
7.(可选)为了提高标记细胞的纯度，洗脱部分可以在第二个xM或xL柱上富集。使用新的分选柱重复步骤1至6中描述的磁选过程。
储存条件
在2-8℃条件下避光保存，请勿冷冻。有效期见试剂外标签。
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