新品 | 小鼠CD8+细胞分选试剂盒（阳选）
日期：2024-11-18 阅读：
产品描述
小鼠CD8+细胞分选试剂盒（阳选法）适用于从小鼠脾脏细胞或其它组织的单细胞悬液中分选出CD8+细胞。原理是利用CD8抗体对CD8+细胞进行标记，然后通过磁珠对目标细胞进行捕获，再用磁珠去除buffer将磁珠从细胞表面解离，从而得到无磁珠标记的小鼠CD8+细胞。分选得到的CD8+细胞可应用于下游的分子生物学和细胞生物学实验。
适用范围
本试剂盒适用于分选小鼠淋巴器官，如脾脏和淋巴结中的CD8+细胞。
产品信息
使用方法
以分选小鼠脾脏CD8+细胞为例：
1.制备单细胞悬液：在70μm细胞筛网上研磨脾脏，以预冷的PBS冲洗细胞筛网，收集细胞悬液于50mL离心管中，500g，离心5min。
2.离心结束，弃上清，加入5mL红细胞裂解液（ACK），室温裂解5min，再加入20mL PBS，500g，离心5min。
3.离心完成后，弃上清，将脾细胞重悬于PBS，细胞悬液用70μm细胞筛网过滤后，计数。计数完成后，500g，离心5min。
4.离心完成后，弃上清，将细胞重悬于分选buffer中，调整细胞密度为1×108cells/mL。
5.将500μL细胞悬液（5×107个细胞）加入无菌流式管底部，再加入10μL CD8抗体，混匀后4°C孵育10min。
6.孵育完成后，在流式管中加入100μL清洗过的磁珠，混匀后4°C孵育10min。
7.孵育完成后，在流式管中加入2.5mL分选buffer，用移液器吹打5次混匀（避免上下颠倒混匀）。将流式管置于磁力架上，静置5min。
8.吸出并丢弃上清液。将流式管从磁力架上取下，迅速加入2mL分选buffer重悬磁珠，用移液器反复吹打分散磁珠。将流式管置于磁力架上，静置5min。
9.重复步骤8两次（清洗步骤可以保证获得高纯度的目的细胞）。
10.磁吸结束后，吸出并丢弃上清液。将流式管从磁力架上取下，迅速加入1mL磁珠去除缓冲液重悬磁珠，避免磁珠干燥，将磁珠悬液转移至1.5mL离心管中，室温旋转孵育10分钟。
11.孵育完成后，用移液器反复吹打至少10次，将磁珠悬液转移至一个新的流式管中，补加分选buffer至2.5mL，吹打混匀，置于磁力架上，静置5分钟。
12.将上清液转移到一个15mL离心管中备用（上清中含有目的细胞，不要丢弃）。迅速用1mL磁珠去除缓冲液重悬磁珠，避免磁珠干燥，将磁珠悬液转移至1.5mL离心管中，室温旋转孵育10分钟。
13.孵育完成后，用移液器反复吹打至少10次，将磁珠悬液转移至一个新的流式管中，补加分选buffer至2.5mL，吹打混匀，置于磁力架上，静置5分钟。
14.将上清液与次洗脱后的细胞上清液混合，500g，离心5min，弃上清，即可收集到无磁珠标记的CD8+细胞。
15.根据实验需要洗涤细胞后，将细胞重悬于所需缓冲液或培养基中，可用于后续分子生物学或细胞生物学实验。
储存条件
2-8°C避光保存，请勿冷冻。有效期见试剂外标签。
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