新品 | 小鼠CD326（EpCAM）磁珠
日期：2024-10-08 阅读：
产品描述
CD326（EpCAM）是一种40kDa跨膜糖蛋白，参与细胞粘附、细胞增殖和肿瘤进展。它是一种同型的钙非依赖性细胞粘附分子。EpCAM广泛表达于上皮细胞，包括内胚层细胞、角质形成细胞、未成熟胸腺细胞、朗格汉斯细胞、淋巴结树突状细胞、胸腺树突状细胞、脾树突状细胞，以及包括几乎所有癌症在内的肿瘤细胞。此外，EpCAM在小鼠胚胎干细胞上也有表达，并被描述为鉴定成功重编程的诱导多能干细胞（iPS）的标记。
分选原理
首先，用CD326(EpCAM)磁珠对CD326(EpCAM)+细胞进行磁性标记。然后，将细胞悬浮液装载到分选柱上，该分选柱置于分选器的磁场中。磁性标记的CD326(EpCAM)+细胞保留在柱内，未标记的细胞则流出。将分选柱移出磁场后，磁性保留的CD326(EpCAM)+细胞可以作为阳选的细胞部分被洗脱。为了提高纯度，含有CD326(EpCAM)+细胞的阳选部分必须在第二个分选柱上分选。
产品信息
使用方法
试剂和设备试剂和仪器要求
●缓冲液：配制含有pH7.2 PBS、0.5%牛血清白蛋白（BSA）和2m MEDTA的溶液。将缓冲液置于2-8°C。使用前对缓冲液进行脱气处理，因为空气气泡可能会堵塞分选柱。
●分选柱和分选器：CD326(EpCAM)阳性细胞可以用xL分选柱富集。
●(可选)荧光偶联的抗体用于流式分析。
●(可选)PI或7-AAD可以用于流式分析中排除死细胞。
●(可选)死细胞清除试剂盒用于死细胞的清除。
●(可选)预分离过滤器去除细胞团块。
●(可选)滤网（30μm）
●(可选)组织解离器，全自动组织解离器或带加热模块的全自动组织解离器。
●(可选)肿瘤分离试剂盒，小鼠
●(可选)CD45分选磁珠，小鼠
操作步骤
一、样本准备
当处理淋巴器官、非淋巴组织或外周血时，使用组织解离器制备单细胞悬液。
CD326(EpCAM)除了存在于上皮细胞、肿瘤细胞和胚胎干细胞外，还表达于白细胞亚型。因此，在从离体的原始组织中分离上皮细胞或肿瘤细胞时，必须使用小鼠CD45分选磁珠等方法去除这些细胞。
二、磁珠标记
1.细胞计数。
2.300×g离心10分钟。去除上清。
3.每107个细胞总量使用90μL缓冲液重悬。
4.每107个细胞总量添加10μL CD326(EpCAM)磁珠。
5.混匀，2−8°C孵育15分钟。
6.(可选)根据说明书推荐，添加染色抗体。
7.每107个细胞加入1-2mL缓冲液洗涤细胞，300×g离心10分钟，去上清。
8.用500μL缓冲液重悬多108个细胞。
9.进行细胞分选步骤。
三、细胞分选
xL分选柱进行细胞分选
1.将分选柱置于相对应的分选器中。
2.用3mL的缓冲液润洗分选柱。
3.将细胞悬液转移至分选柱中。收集包含未标记细胞的流出液。
4.加3mL的缓冲液洗脱，待液体全部流尽，再加入适量缓冲液，一共洗3次。收集总流出物，和第三步流出物混合。
5.将分选柱从分选器中取出，并将其放在合适的收集管上。
6.加入5mL的缓冲液到分选柱中，迅速用塞子推下，得到就是磁性标记的细胞。
7.（可选）为了提高CD326(EpCAM)+细胞的纯度，洗脱的部分可以在第二个xL柱上富集。用新的分选柱重复步骤1至6中描述的磁分选过程。
储存条件
2-8°C避光保存，请勿冷冻。有效期见试剂外标签。
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