新品 | 小鼠CD146(LSEC)分选磁珠
日期：2024-09-18 阅读：
产品描述
CD146是一种跨膜糖蛋白，属于细胞粘附分子的IgG超家族CD146（LSEC）抗体与小鼠肝窦内皮细胞（LSECs）结合，后者是肝窦壁内的微血管内皮细胞，主要有助于控制对肝脏中循环可溶性抗原的免疫应答。他们的战略定位有利于与通过肝脏迁移的淋巴细胞的紧密相互作用。LSEC具有较高的抗原摄取和加工能力，但与专业抗原呈递细胞（如树突状细胞）相比，仅表达低水平的共刺激分子。
CD146（LSEC）抗体还与来自各种器官的内皮细胞结合，例如皮肤，肝脏，肾脏，脑，脾，淋巴结，肠，心脏和骨骼肌以及血管结构，例如肺动脉，静脉和肺泡壁的毛细血管网，但不包括淋巴管内皮。与在T细胞或滤泡树突细胞上也表达CD146的人相反，鼠CD146表达仅在低水平的NK1.1+细胞亚群中发现。
分选原理
首先，用CD146(LSEC)磁珠对肝窦状内皮细胞进行磁性标记。然后，将细胞悬浮液装入分选柱，分选柱置于分选器磁场中。磁性标记的LSEC细胞被保留在柱中，未标记的细胞顺着分选柱流出。将柱从磁场中移出后，磁性保留的LSEC细胞可作为正选细胞部分被洗脱出来。
产品信息
使用方法
试剂和仪器要求
●缓冲液：配制含有pH7.2PBS、0.5%牛血清白蛋白（BSA）和2m MEDTA的溶液。将缓冲液置于2-8°C。使用前对缓冲液进行脱气处理，因为空气气泡可能会堵塞分选柱
●分选柱和分离器：CD146阳性细胞可以用xM、xL分选柱富集。
●肝脏解离试剂盒，小鼠
●(可选)荧光偶联的CD146抗体用于流式分析。
●(可选)FcR阻断试剂，小鼠
●(可选)PI或7-AAD可以用于流式分析中排除死细胞。
●(可选)死细胞清除试剂盒用于死细胞的清除。
●(可选)预分离过滤器去除细胞团块。
操作步骤
一、样本准备
使用组织离解器，按照小鼠肝脏解离试剂盒的说明书离解小鼠肝脏。
二、磁珠标记
1.细胞计数。
2.300×g离心10分钟。去除上清。
3.每107个细胞总量使用90μL缓冲液重悬。
4.每107个细胞总量添加10μL CD146(LSEC)磁珠。
5.混匀，2−8°C孵育15分钟。
6.(可选)添加染色抗体，例如：10μL CD146(LSEC)-FITC 2−8°C避光孵育5分钟。
7.每107个细胞加入1-2mL缓冲液洗涤细胞，300×g离心10分钟，去上清。
8.用500μL缓冲液重悬多108个细胞。
9.进行细胞分选步骤。
三、细胞分选
xM或xL分选柱进行细胞分选
1.将分选柱置于相对应的分选器中。
2.用适当体积的缓冲液润洗分选柱（xM:500μL；xL:3mL）
3.将细胞悬液转移至分选柱中。收集包含未标记细胞的流出液。
4.结合磁珠的细胞会被吸附到分选柱上，没有结合的细胞会顺着液体流下来。加适量的缓冲液，待液体全部流尽，再加入适量缓冲液，一共洗3次。收集总流出物，和第3步的流出液混合。（xM:3×500μL；xL:3×3mL）
5.将分选柱从分选器中取出，并将其放在合适的收集管上。
6.加适量的缓冲液到分选柱中，迅速用塞子推下，得到就是磁性标记的细胞。（xM:1mL；xL:5mL）
储存条件
2-8°C避光保存，请勿冻存。有效期见试剂外标签。
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