新品 | 小鼠CD45R(B220)分选磁珠
日期：2024-08-26 阅读：
产品描述
小鼠CD45R（B220）磁珠用于从各种淋巴组织（如骨髓，淋巴结和脾脏）或非淋巴组织（如固有层，腹膜腔或肺）中阳选或去除小鼠B细胞。从早期pro-B细胞阶段开始，CD45R抗原在B谱系细胞的整个发育过程中表达，并在终分化为浆细胞时被下调表达。CD45R也在浆细胞样树突细胞上表达。
分选原理
首先，用CD45R(B220)磁珠对CD45R(B220)+细胞进行磁性标记。然后，将细胞悬浮液装入置于分选器磁场的分选柱中。磁性标记的CD45R(B220)+细胞被保留在柱中，未标记的细胞顺着分选柱流出。将柱从磁场中移出后，磁性保留的CD45R(B220)+细胞可作为正选细胞部分被洗脱出来。
产品信息
使用方法
试剂和仪器要求
●缓冲液（脱气）：配制含有pH7.2PBS、0.5%牛血清白蛋白（BSA）和2mMEDTA的溶液。将缓冲液置于2-8°C。
●分选柱和分选器：CD45R（B220）阳性细胞可以用xM、xL分选柱富集。强烈表达CD45R（B220）抗原的细胞也可以用xM、xL分选柱去除。
●(可选)荧光偶联的CD45R抗体用于流式分析。
●(可选)PI或7-AAD可以用于流式分析中排除死细胞。
●(可选)预分离过滤器去除细胞团块。
操作步骤
一、样本准备
用标准方法从淋巴器官、非淋巴组织或外周血中制备单细胞悬液。
二、磁珠标记
1.细胞计数。
2.300×g离心10分钟。去除上清。
3.每107个细胞总量使用90μL缓冲液重悬。
4.每107个细胞总量添加10μL CD45R（B220）磁珠。
5.混匀，2−8°C孵育15分钟。
6.(可选)添加染色抗体，例如：根据说明书推荐添加荧光偶联的CD45R抗体2−8°C避光孵育5分钟。
7.每107个细胞加入1-2mL缓冲液洗涤细胞，300×g离心10分钟，去上清。
8.用500μL缓冲液重悬多108个细胞。
9.进行细胞分选步骤。
三、细胞分选
xM或xL分选柱进行细胞分选
1.将分选柱置于相对应的分选器中。
2.用适当体积的缓冲液润洗分选柱（xM:500μL；xL:3mL）
3.将细胞悬液转移至分选柱中。
4.结合磁珠的细胞会被吸附到分选柱上，没有结合的细胞会顺着液体流下来。加适量的缓冲液，待液体全部流尽，再加入适量缓冲液，一共洗3次。收集总流出物，这是未标记的细胞。（xM:3×500μL；xL:3×3mL）
5.将分选柱从分选器中取出，并将其放在合适的收集管上。
6.加适量的缓冲液到分选柱中，迅速用塞子推下，得到就是磁性标记的细胞。（xM:1mL；xL:5mL）
储存条件
2-8℃避光保存，请勿冻存。有效期见试剂外标签。
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