新品 | 小鼠CD49b（DX5）分选磁珠
日期：2024-08-05 阅读：
产品描述
小鼠CD49b（DX5）磁珠用于从淋巴组织和非淋巴组织的单细胞悬液以及外周血或体液中分离小鼠NK细胞。这种磁珠以前称为抗NK细胞（DX5）磁珠。CD49b在NK细胞和一小部分T细胞（CD4+CD3+TCRαβ+）上表达。在富集NK细胞之前，可使用CD90(Thy1.2)磁珠或CD5磁珠清除这些细胞。与其他NK细胞标记物（如NK1.1）相比，CD49b对小鼠品系的特异性较低，常见的近交系小鼠品系都能表达CD49b。
分选原理
首先，用CD49b（DX5）磁珠对CD49b（DX5）+细胞进行磁性标记。然后，将细胞悬浮液装入置于分选器磁场的分选柱中。磁性标记的CD49b（DX5）+细胞被保留在柱中，未标记的细胞顺着分选柱流出。将柱从磁场中移出后，磁性保留的NK细胞可作为正选细胞部分被洗脱出来。
产品信息
使用方法
试剂和仪器要求
●缓冲液：配制含有pH7.2PBS、0.5%牛血清白蛋白（BSA）和2mMEDTA的溶液。将缓冲液置于2-8°C。使用前对缓冲液进行脱气处理，因为空气气泡可能会堵塞分选柱。
●分选柱和分选器：CD49b阳性细胞可以用xM、xL分选柱富集。强烈表达CD49b抗原的细胞也可以用xM、xL分选柱去除。
●(可选)荧光偶联的抗体用于流式分析。
●(可选)PI或7-AAD可以用于流式分析中排除死细胞。
●(可选)预分离过滤器去除细胞团块。
操作步骤
一.样本准备
用标准方法从淋巴器官、非淋巴组织或外周血中制备单细胞悬液。
二.磁珠标记
1.细胞计数。
2.300×g离心10分钟。去除上清。
3.每107个细胞总量使用90μL缓冲液重悬。
4.每107个细胞总量添加10μLCD49b(DX5)磁珠。
5.混匀，2−8°C孵育15分钟。
6.(可选)添加染色抗体，根据说明书推荐添加CD49b荧光抗体2−8°C避光孵育5分钟。
7.每107个细胞加入1-2mL缓冲液洗涤细胞，300×g离心10分钟，去上清。
8.用500μL缓冲液重悬多108个细胞。
9.进行细胞分选步骤。
三.细胞分选
xM或xL分选柱进行细胞分选
1.将分选柱置于相对应的分选器中。
2.用适当体积的缓冲液润洗分选柱（xM:500μL；xL:3mL）
3.将细胞悬液转移至分选柱中。
4.结合磁珠的细胞会被吸附到分选柱上，没有结合的细胞会顺着液体流下来。加适量的缓冲液，待液体全部流尽，再加入适量缓冲液，一共洗3次。收集总流出物，这是未标记的细胞。（xM:3×500μL；xL:3×3mL）
5.将分选柱从分选器中取出，并将其放在合适的收集管上。
6.加适量的缓冲液到分选柱中，迅速用塞子推下，得到就是磁性标记的细胞。（xM:1mL；xL:5mL）
储存条件
2-8℃避光保存，请勿冻存。有效期见试剂外标签。
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