新品 | 人全血CD138磁珠
日期：2024-07-22 阅读：
产品描述
全血CD138磁珠用于直接从人全血或骨髓中快速正选CD138+细胞，从而大限度地减少手动操作时间并将靶细胞的产量大化。不需要包括密度梯度离心和红细胞裂解的样品制备。
CD138抗原，也称为syndecan-1，主要在骨髓中的正常和恶性浆细胞上表达。在健康供体的外周血中，约50%的浆细胞表达该抗原。相反，初始B细胞，生发中心B细胞，记忆B细胞，T细胞和单核细胞不表达CD138。
分选原理
首先，用全血CD138磁珠对全血或骨髓样本中的CD138+细胞进行磁性标记。然后，将细胞悬浮液置于分选柱上，该分选柱置于分选器的磁场中。磁性标记的CD138+细胞被保留在柱内，未标记的细胞流出分选柱。从磁场中移除分选柱后，磁性标记的CD138+细胞作为正选细胞部分被洗脱出来。
产品信息
使用方法
试剂和仪器要求
●分离缓冲液:配制含有pH7.2PBS、0.5%牛血清白蛋白(BSA)和2mMEDTA的溶液。将缓冲液置于2-8℃。使用前对缓冲液进行脱气处理，因为空气气泡可能会堵塞分选柱。
●用于制备骨髓细胞的含HEPES缓冲液的细胞培养基(如IMDM)，添加100U/mL的肝素。
●滤网(100μm)，用于去除骨碎片和细胞团块。
●(可选)用于流式细胞分析的荧光偶联抗体，如CD138-PE、CD45-FITC或CD19-APC。
●(可选)碘化丙啶溶液或7-AAD，用于流式细胞仪排除死细胞。
●(可选)预分离过滤器(30μm)，用于去除细胞团块。
●(可选)红细胞裂解液(10X)。
操作步骤
一、全血准备
1.在含有适当抗凝剂的采血管中收集多15mL的全血。
2.进行磁性标记。
二、骨髓细胞的制备
1.用抽吸针从髂嵴上部或胸骨处抽取2-10mL骨髓。
2.将骨髓移入装有等体积HEPES缓冲细胞培养基的50mL离心管中。
3.通过细胞滤网(100μm)，以去除骨碎片或细胞团块。使用前用分离缓冲液浸湿过滤器。
4.在不带刹车器的吊桶离心机以445Xg离心10分钟，温度20℃。
5.用分离缓冲液重悬细胞颗粒至步骤1中所用的原始体积。
6.进行磁性标记。
三、磁珠标记
1.每1mL抗凝全血或骨髓中加入50μL全血CD138磁珠。
2.混匀并在冰箱(2-8℃)中孵育15分钟。
3.(可选)每1mL全血加入2-5mL分离缓冲液洗涤细胞，然后在室温下于无刹车器的吊桶离心机以445Xg离心10分钟。小心吸出上清液。不要搅动细胞团。保留一定量的上清液(约1-2毫米高)以避免细胞丢失。
加入一体积的分离缓冲液至总体积为1mL，重悬细胞团。
4.进行细胞分选步骤。
四、使用全血分选柱进行细胞分选
1.将全血柱放入合适的分选器磁场中。
2.用3mL分离缓冲液冲洗柱子。
3.将磁性标记的细胞悬浮液装载到准备好的全血柱上。收集含有未标记细胞的流出液。
4.用2X2mL分离缓冲液清洗全血柱。收集通过的未标记细胞，与步骤3的流出液合并。
5.从分选器中取出全血柱，将其置于新的收集管中。
6.将4mL分离缓冲液移至全血柱上。将活塞推入全血柱，立即冲洗出磁性标记的细胞。
7.(可选)为提高磁性标记的细胞纯度，可将洗脱的部分富集到新的xM柱或xL柱上。
8.(可选)剩余的红细胞可用红细胞裂解液(10X)裂解。
储存条件
在2-8℃条件下避光保存，请勿冻存。有效期见试剂外标签。
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