新品 | A2B5分选磁珠试剂盒，人，小鼠
日期：2024-07-08 阅读：
产品描述
基于A2B5抗原的表达，抗A2B5磁珠试剂盒被开发用于分离人和小鼠多能干细胞衍生的神经胶质前体细胞。神经节苷脂GT3及其O-乙酰化衍生物是主要的A2B5反应性神经节苷脂。在限定条件下人和小鼠多能干细胞的体外分化揭示少突胶质细胞前体细胞表达表面标志物A2B5。体外产生的神经胶质前体的磁性富集将有助于获得高纯度的A2B5阳性细胞群，甚至可以缩短已建立的分化方案。
分选原理
首先，用抗A2B5-APC和抗APC磁珠对多能干细胞衍生的A2B5+细胞进行间接磁性标记。然后，将细胞悬浮液装入分选柱，该分选柱置于分选器的磁场中。磁性标记的A2B5+细胞被保留在柱内，未标记的细胞顺着分选柱流出。将分选柱从磁场中移出后，磁性保留的A2B5+细胞可作为正选细胞部分被洗脱出来。
产品信息
使用方法
试剂和仪器要求
● DPBS 缓冲液:不含 Ca²+和 Mg²+的Dulbecco 磷酸盐缓冲盐水(DPBS)。
● PB 缓冲液:Dulbecco 's 磷酸盐缓冲盐水(DPBS)，不含 Ca²+和 Mg²+和 0.5%牛血清白蛋白(BSA)。将缓冲液置于 2-8 °C。使用前对缓冲液进行脱气处理，因为空气气泡可能会堵塞分选柱。
● 分选柱和分选器：为了获得佳纯度和回收率，强烈建议使用 xL 柱。
● (可选) 类胚胎体解离试剂盒，小鼠和人
● (可选) 胰蛋白酶溶液:0.05%胰蛋白酶，2mM EDTA。
● (可选) 预分离过滤器去除细胞团块。
● (可选) 5mL 血清移液管。
● (可选) 试管混匀器
操作步骤
一、样本准备
制备小鼠细胞
多能干细胞在DMEM和10%胎牛血清中以1×10⁵细胞/毫升的悬浮液培养4-5天分化为胚状体。在抗体标记前，使用类胚体解离试剂盒生成单细胞悬浮液。
人源细胞的制备
人类多能干细胞的分化遵循Chambers等人和Zhou等人发表的方案。分化10天后，按以下方法收获细胞：
1.移除分化培养基，用DPBS缓冲液清洗培养板两次。
2.每10厘米培养皿加入2毫升胰蛋白酶溶液（0.05%胰蛋白酶，2mMEDTA），37°C，5分钟，使细胞分离。
3.加入大豆胰蛋白酶抑制剂停止酶促反应。
4.用5mL血清移液管上下吹吸，使其离解为单细胞悬浮液。
5.将细胞通过70μm尼龙网，以去除可能堵塞分选柱的细胞团块。使用前用缓冲液或培养基湿润过滤器。
二、磁珠标记
1.细胞计数。
2.300×g离心5分钟。去除上清。
3.每107个细胞总量使用100μL PB缓冲液重悬。
4.每107个细胞总量添加10μL抗A2B5-APC。
5.混匀，2−8°C避光孵育10分钟。
6.每107个细胞加入1-2mL PB缓冲液洗涤细胞，300×g离心5分钟，去上清。
7.每107个细胞总量使用80μL PB缓冲液重悬。
8.每107个细胞总量使用20μL Anti-APC磁珠。
9.混匀，2−8°C避光孵育15分钟。
10.每107个细胞加入1-2mL PB缓冲液洗涤细胞，300×g离心5分钟，去上清。
11.用500μL PB缓冲液重悬多107个细胞。
12.进行细胞分选步骤。
三、细胞分选
xL分选柱进行细胞分选
1.将分选柱置于相对应的分选器中。
2.用3mL的缓冲液润洗分选柱：
3.将细胞悬液转移至分选柱中。收集包含未标记细胞的流出液。
4.加3mL的缓冲液洗脱，待液体全部流尽，再加入适量缓冲液，一共洗3次。收集总流出物，和第三步流出物混合。
5.将分选柱从分选器中取出，并将其放在合适的收集管上。
6.加入5mL的缓冲液到分选柱中，迅速用塞子推下，得到就是磁性标记的细胞。
储存条件
2-8°C避光保存，请勿冷冻。有效期见试剂外标签。
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