新品 | 人CD3分选磁珠，冻干粉
日期：2024-06-03 阅读：
产品描述
CD3 在所有T细胞上表达,并与T细胞受体相关。人类外周血淋巴细胞的70-80%和胸腺细胞的65-85%是CD3+。CD3磁珠识别的表位位于CD3ε链上。
分选原理
首先，用CD3 磁珠对CD3+细胞进行磁性标记。然后，将细胞悬液装入置于分选器磁场的柱中。磁性标记的CD3+细胞被保留在柱中，未标记的细胞顺着分选柱流出。将柱从磁场中移出后，磁性标记的CD3+细胞可作为正选细胞部分被洗脱出来。
产品信息
使用方法
试剂和仪器要求
●缓冲液:配制含有pH7.2PBS、0.5%牛血清白蛋白(BSA)和2mMEDTA 的溶液。
●分选柱和分离器:CD3阳性细胞可以用xM、xL分选柱富集。强烈表达CD3抗原的细胞也可以用xM、xL 分选柱去除。
●(可选)荧光偶联的CD3抗体用于流式分析。
●(可选) PI 或7-AAD可以用于流式分析中排除死细胞。
●(可选)死细胞清除试剂盒用于死细胞的清除。
●(可选)预分离过滤器去除细胞团块。
操作步骤
一、磁珠复溶
向小瓶中加入所有复溶缓冲液，溶解冻干磁珠。用移液管吹吸混合，直至重新悬浮。溶解后的磁珠在2-8℃下可稳定保存4个月。在小瓶标签上写上复溶后的新有效期。
二、样本准备
在处理抗凝外周血或白膜层时，应使用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMC)。
当处理组织或溶血时，使用标准方法制备单细胞悬浮液。
三、磁珠标记
1.细胞计数。
2.300xg离心10分钟。去除上清。
3.每107个细胞总量使用80μL缓冲液重悬。
4.每107个细胞总量添加20μL CD3 磁珠。
5.混匀，2-8℃孵育15分钟。
6.(可选)添加染色抗体，例如:10μL CD3-FITC2-8℃避光孵育5分钟。
7.每107个细胞加入1-2mL缓冲液洗涤细胞，300xg离心10分钟，去上清。
8.用 500μL缓冲液重悬多108个细胞。
9.进行细胞分选步骤。
四、细胞分选
xM 或xL分选柱进行细胞分选
1.将分选柱置于相对应的分选器中。
2.用适当体积的缓冲液润洗分选柱（xM:500 μL；xL:3mL）
3.将细胞悬液转移至分选柱中。收集包含未标记细胞的流出液。
4.结合磁珠的细胞会被吸附到分选柱上，没有结合的细胞会顺着液体流下来。加适量的缓冲液，待液体全部流尽，再加入适量缓冲液，一共洗3次。收集总流出物，和第3步的流出液混合。（xM: 3x500 μL；xL:3x3mL）
5.将分选柱从分选器中取出，并将其放在合适的收集管上。
6.加适量的缓冲液到分选柱中，迅速用塞子推下，得到就是磁性标记的细胞。（xM:1mL；xL:5mL）
储存条件
2-8℃避光保存，请勿冻存。有效期见试剂外标签。
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