新品 | 抗生物素分选磁珠
日期：2024-04-15 阅读：
产品描述
分选原理
1.细胞计数。
2.(可选)以适当的比例添加人或小鼠FcR封闭试剂。
3.根据说明书建议用生物素偶联一抗进行染色。首先，用生物素偶联的一抗或其配体对细胞进行染色。随后，用抗生物素磁珠对细胞进行磁性标记。然后将细胞悬液加载到分选柱上，该分选柱置于分选器的磁场中。磁性标记的细胞保留在柱中，而未标记的细胞则通过。将分选柱从磁场中移开后，磁性标记的细胞可以作为正选细胞被洗脱下来。
产品信息
使用方法
试剂和仪器要求
●缓冲液:含有pH7.2、0.5%BSA和 2mM EDTA的溶液。保持缓冲液冷却状态(2-8C)。
●分选柱和分选器:抗生物素磁珠标记的细胞可通过xM、xL柱(阳性选择)进行富集。也可以使用自动分选器进行阳性选择。
●生物素偶联的一抗或配体。
●(可选)FcR封闭试剂，人/小鼠。
●(可选) PI(碘化丙啶)或7-AAD 用于流式细胞术排除死亡细胞。
●(可选)预分离过滤器用于去除细胞团块。
●(可选)死细胞去除试剂盒，用于去除死细胞。
操作步骤
一、样本准备
当使用抗凝外周血或白膜层时，应通过密度梯度离心分离外周血单个核细胞(PBMC)。
二、磁珠标记
1.细胞计数。
2.(可选)以适当的比例添加人或小鼠FcR封闭试剂。
3.根据说明书建议用生物素偶联一抗进行染色。
4.充分混合并在冰箱(2-8℃)中避光孵育5分钟或按照说明书的建议进行。
5.每 107细胞添加1-2mL缓冲液,洗涤细胞以去除未结合的一抗，并以300Xg离心10分钟。
6.(可选)重复清洗步骤。
7.完全吸出上清液，每107个总细胞加适量缓冲液重悬细胞沉淀。
当不使用FcR封闭试剂时，请重悬于80μL缓冲液中。
当使用FcR封闭试剂时，将人源细胞重悬于60μL缓冲液中。
当使用FcR封闭试剂时，将小鼠细胞重悬于70μL缓冲液中。
8.每107总细胞添加20μL抗生物素磁珠。
9.充分混合并在冰箱(2-8℃)中孵育15 分钟。
10.每107细胞添加1-2mL缓冲液洗涤细胞，并以300Xg离心10分钟。
11.完全吸出上清液。
12.加500μL缓冲液中重悬细胞，多重悬108个细胞。
13.进行磁分选。
三、细胞分选
1.将分选柱放置在分选器的磁场中。
2.将分选柱中加入适量缓冲液，充分湿润分选柱（xM: 500 μL；xL: 3 mL ）
3.将细胞悬液加到分选柱中。
4.结合磁珠的细胞会被吸附到分选柱上，没有结合的细胞会顺着液体流下来。加适量的缓冲液，待液体全部流尽，再加入适量缓冲液，一共洗3次。收集总流出物。这是未标记的细胞。（xM:3X500μL；xL:3x3mL）
5.将分选柱从分选器中取出，并将其放在合适的收集管上。
6.加适量的缓冲液到分选柱中，迅速用塞子推下，得到就是磁性标记的细胞。（xM:1mL；xL:5mL）
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