新品 | CD14分选磁珠，人
日期：2024-03-25 阅读：
产品描述
CD14磁珠可用于从脐带血或PBMC以及胸膜、腹膜或滑膜液、脾脏和淋巴结等各种组织中阳性分选或去除人单核细胞和巨噬细胞。CD14抗原属于LPS受体复合物。由于CD14缺乏胞浆结构域，因此抗体与CD14结合不会触发信号转导。CD14在大多数单核细胞和巨噬细胞上强表达，在中性粒细胞和一些髓系树突状细胞上弱表达。
分选原理
用CD14磁珠对CD14+细胞进行磁性标记后，将细胞悬浮液装入置于分选器磁场的柱中。磁性标记的CD14+细胞被保留在柱中，未标记的细胞顺着分选柱流出。将柱从磁场中移出后，磁性保留的CD14+细胞可作为正选细胞部分被洗脱出来。
产品信息
使用方法
试剂和仪器要求
●缓冲液（pH 7.2 PBS、0.5% BSA、 2mM EDTA，2-8°C，脱气处理）
●分选柱和分离器：CD14阳性细胞可以用xM、xL分选柱富集。强烈表达CD14抗原的细胞也可以用xM、xL分选柱去除。
●(可选)荧光偶联的CD14抗体用于流式分析。
●(可选)PI或7-AAD可以用于流式分析中排除死细胞。
●(可选)死细胞清除试剂盒用于死细胞的清除。
●(可选)预分离过滤器去除细胞团块。
操作步骤
一、样本准备
在处理抗凝外周血或白膜层时， 应使用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞（PBMC） 。
当处理组织或溶血时， 使用标准方法制备单细胞悬浮液。
二、磁珠标记
1.细胞计数。
2.300×g离心10分钟。去除上清。
3.每107个细胞总量使用80μL缓冲液重悬。
4.每107个细胞总量添加20μL CD14磁珠。
5.混匀，2−8°C孵育15分钟。
6.(可选)添加染色抗体，例如：10 μL CD14-FITC 2−8°C避光孵育5分钟.
7.每107个细胞加入1-2mL缓冲液洗涤细胞，300×g离心10分钟，去上清。
8.用500μL缓冲液重悬多108个细胞。
9.进行细胞分选步骤。
三、细胞分选
xM或xL分选柱进行细胞分选
1. 将分选柱置于相对应的分选器中。
2. 用适当体积的缓冲液润洗分选柱（xM: 500 μL；xL: 3 mL）
3. 将细胞悬液转移至分选柱中。
4. 结合磁珠的细胞会被吸附到分选柱上， 没有结合的细胞会顺着液体流下来。加适量的缓冲液， 待液体全部流尽， 再加入适量缓冲液， 一共洗 3 次。收集总流出物， 这是未标记的细胞。（xM: 3×500 μL；xL: 3×3 mL）
5. 将分选柱从分选器中取出， 并将其放在合适的收集管上。
6. 加适量的缓冲液到分选柱中， 迅速用塞子推下， 得到就是目的细胞。（xM: 1 mL；xL: 5 mL）
储存条件
2-8°C避光保存，请勿冷冻。有效期见试剂外标签。
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