新品 | 抗F4/80超纯分选磁珠，小鼠
日期：2024-03-18 阅读：
产品描述
F4/80是表皮生长因子（EGF）跨膜7（TM7）家族的成员，由一个跨度为7个跨膜的分子组成，具有一个大的细胞外多个包含EGF模块的结构域。F4/80被认为是鼠巨噬细胞特异的细胞表面标记之一。在大多数长存的组织巨噬细胞中发现F4/80的组成型和高表达，包括脾脏，大脑中的小胶质细胞，肝脏中的Kupffer细胞和皮肤中的Langerhans细胞。另外，还可以根据细胞的生理状态来调节F4/80的表达。
抗F4/80超纯化磁珠经过优化，可从淋巴和非淋巴组织的单细胞悬液中快速，简单地分离小鼠巨噬细胞。超纯化磁珠通过特异性富集活细胞，大大提高了分选细胞的回收率和纯度。
产品信息
使用方法
试剂和仪器要求
●缓冲液（pH 7.2 PBS、0.5% BSA、2 mM EDTA、2-8°C）
●分选柱和分选器
●(可选)荧光偶联的抗体用于流式分析。
●(可选)PI或7-AAD可以用于流式分析中排除死细胞。
●(可选)死细胞清除试剂盒用于死细胞的清除。
●(可选)预分离过滤器去除细胞团块。
操作步骤
一、样本准备
在处理淋巴器官或肺淋巴组织时，应使用手动方法或者组织解离器制备单细胞悬浮液。
二、磁珠标记
1.细胞计数。
2.300×g离心10分钟。去除上清。
3.每107个细胞总量使用90μL缓冲液重悬。
4.每107个细胞总量加入10μL抗F4/80超纯磁珠。
5.混匀，2−8°C下避光孵育15分钟。
6.每107个细胞加入1-2mL缓冲液洗涤细胞，300×g离心10分钟，去上清。
7.用500μL缓冲液重悬多108个细胞。
8.进行细胞分选步骤。
三、细胞分选
xM或xL分选柱进行细胞分选
1.将分选柱置于相对应的分选器中。
2.用适当体积的缓冲液润洗分选柱（xM:500μL；xL:3mL）
3.将细胞悬液转移至分选柱中。收集流出的未标记细胞。
4.加适量缓冲液洗脱，待液体全部流尽，再加入适量缓冲液，一共洗3次。收集总流出物和第三步流出物混合。（xM:3×500μL；xL:3×3mL）
5.将分选柱从分选器中取出，并将其放在合适的收集管上。
6.加适量的缓冲液到分选柱中，迅速用塞子推下，得到就是标记的细胞。（xM:1mL；xL:5mL）
7.为了提高F4/80+细胞的纯度，洗脱的部分必须在第二个xM或xL柱上富集。用新的分选柱重复步骤1至6中描述的磁分选过程。
储存条件
2-8°C避光保存，请勿冷冻。有效期见试剂外标签。
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