新品 | CD34细胞分选试剂盒， 人
日期：2024-01-22 阅读：
产品描述
CD34 抗原是一种单链跨膜糖蛋白， 表达于人类造血祖细胞、 内皮祖细胞、 血管内皮细胞、 胚胎成纤维细胞以及胎儿和成人神经组织中的某些细胞。
CD34 细胞分选试剂盒含有直接与 CD34 抗体连接的磁珠， 用于外周血、 脐带血、 骨髓、 无细胞采血收获物或分化的 ES 和 iPS 细胞中表达 CD34 的细胞进行磁性标记。造血祖细胞在外周血中的占比约为 0.05-0.2%， 在脐带血中约为 0.1-0.5%， 在骨髓中约为 0.5-3%。
产品信息
使用方法
试剂和仪器要求
1.缓冲液: （pH7.2 PBS、0.5% BSA、2 mM EDTA，2-8C)。
2.分选柱和分选器
3.(可选) MC CD34干细胞混合物用于分离细胞的流式细胞术分析。
4.(可选) 荧光偶联的抗体用于流式分析。
5.(可选) PI 或 7-AAD 可以用于流式分析中排除死细胞。
6.(可选) 死细胞清除试剂盒用于死细胞的清除。
7.(可选) 预分离过滤器去除细胞团块。
操作步骤
一、样本准备
在处理抗凝外周血或白膜层时，应使用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞（PBMC）。
当处理组织或溶血时，使用标准方法制备单细胞悬浮液。
从白细胞提取物中制备细胞
1.用30 μm尼龙网过滤采集的细胞，以去除细胞团块。
2.用缓冲液洗涤细胞一次，用300μL缓冲液重悬细胞，细胞数不超过 10⁸。进行磁性标记。
二、磁珠标记
1.细胞计数。
2. 300× g 离心10分钟。去除上清。
3.每10⁸个细胞总量使用300 μL缓冲液重悬。
4.每10⁸个细胞总量加入100 μLFcR阻断剂。
5.每10⁸个细胞总量添加100 μL CD34磁珠。
6.混匀，2−8°C下孵育30分钟。
7. (可选) 添加染色抗体，并在2−8°C 避光孵育5分钟。
8.每 10⁸个细胞加入5 - 10 mL缓冲液洗涤细胞，300× g离心10分钟，去上清。
9.用 500 μL缓冲液重悬多 10⁸个细胞。
10.进行细胞分选步骤。
三、细胞分选
1. 将分选柱置于相对应的分选器中。
2. 用适当体积的缓冲液润洗分选柱（xM: 500μL；xL: 3 mL）
3. 将细胞悬液转移至分选柱中。收集流出的未标记细胞。
4. 加适量缓冲液洗脱，待液体全部流尽，再加入适量缓冲液，一共洗3次。收集总流出物和第三步流出物混合。（xM: 3×500μL；xL: 3×3 mL）
5. 将分选柱从分选器中取出，并将其放在合适的收集管上。
6. 加适量的缓冲液到分选柱中，迅速用塞子推下，得到就是标记的细胞。（xM: 1 mL；xL: 5 mL）
7. 为了提高 CD34+细胞的纯度，洗脱的部分可以在第二个xM或xL柱上富集。用新的分选柱重复步骤 1 至 6 中描述的磁分选过程。
保存方法
在2-8℃条件下避光保存，请勿冷冻。有效期见试剂外标签。
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