新品 | 欣协生物中性粒细胞分选试剂盒，小鼠
日期：2024-01-03 阅读：
产品描述
中性粒细胞分离试剂盒开发用于从小鼠骨髓或血细胞悬浮液中分离未经标记的中性粒细胞。中性粒细胞对宿主防御入侵病原体至关重要。它们是吞噬性多核细胞，其使用多种毒性剂（包括活性氧物质。抗微生物肽和蛋白酶）吞噬和降解微生物。此外，中性粒细胞可以产生抗炎分子和促进炎症消退因子。
使用中性粒细胞分选试剂盒可通过去除非目的细胞来分选小鼠中性粒细胞。非目的细胞用生物素结合的单克隆抗体混合物（作为一级标记试剂）和与磁珠结合的抗生物素单克隆抗体（作为二级标记试剂）进行间接磁性标记。将磁性标记的非目的细胞保留在分选柱中，使其处于分选器的磁场中，从而去除磁性标记的非目的细胞，而未标记的中性粒细胞则流过分选柱。
产品信息
使用方法
试剂和仪器要求
1.缓冲液（pH7.2 PBS、0.5% BSA、2 mM EDTA）
2.分选柱和分离器：根据标记的细胞数和总细胞数选择合适的分选器和分选柱。
3.(可选)荧光偶联的抗体用于流式分析。
4.(可选)PI或7-AAD可以用于流式分析中排除死细胞。
5.(可选)死细胞清除试剂盒用于死细胞的清除。
6.(可选)预分离过滤器去除细胞团块。
操作步骤
一、样本准备
当处理淋巴器官或非淋巴组织时，使用手工方法或组织解离器制备单细胞悬液。
当处理外周血时，需要在磁性标记之前裂解红细胞。
二、磁珠标记
1.细胞计数。
2.300×g离心10分钟。去除上清。
3.每5×10⁷个细胞总量使用200μL缓冲液重悬。
4.每5×10⁷个细胞总量添加50μL生物素抗体混合物。
5.混匀，2−8°C孵育10分钟。
6.每5×10⁷细胞加入5-10mL缓冲液洗涤细胞，并在300×g离心10分钟。去除上清。
7.每5×10⁷个细胞使用400μL缓冲液重悬。
8.每5×10⁷个细胞添加100μL抗生物素磁珠。
9.混匀，2−8°C孵育15分钟。
10.每5×10⁷个细胞添加5-10mL缓冲液清洗细胞，300×g离心10分钟，去上清。
11.用500μL缓冲液重悬多10⁸个细胞。
12.进行细胞分选步骤。
三、细胞分选
1.将分选柱置于相对应的分选器中。
2.用适当体积的缓冲液润洗分选柱（xM:500μL；xL:3mL）
3.将细胞悬液转移至分选柱中。收集流下来的包含未标记的细胞，代表的是富集的中性粒细胞。
4.加适量的缓冲液洗脱，待液体全部流尽，再加入适量缓冲液，一共洗3次。收集总流出物和第三步流出物放在一起。（xM:3×500μL；xL:3×3mL）
5.（可选）将分选柱从分选器中取出，并将其放在合适的收集管上。将适量的缓冲液加入分选柱，将柱塞用力推下，立即冲洗出磁性标记的非中性粒细胞。（xM:1mL；xL:5mL）
保存方法
2-8℃避光保存，请勿冻存。有效期见试剂外标签。
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