新品 | 欣协生物人CD4+ T细胞磁珠试剂盒（阳选）
日期：2023-08-23 阅读：
产品描述
欣协生物人CD4+ T细胞磁珠试剂盒（阳选）,根据人细胞表面CD4表达从新鲜或冷冻的外周血单个核细胞(PBMCs)、白细胞分离产物或单细胞悬液中分离CD4+细胞。抗人CD4单克隆抗体表面用超顺磁纳米微珠进行标记，形成磁性纳米颗粒。开始分离，在细胞中添加纳米珠。预先偶联到纳米珠上的CD4抗体可以与细胞表面表达CD4的靶细胞结合。细胞/珠混合悬浮液被加载到分选柱上，当使用分离缓冲液冲洗CD4细胞时，纳米珠标记的CD4+细胞被保留在柱内，并在清洗步骤中富集。去除磁场后，目标CD4+细胞可以很容易地从柱中洗脱。
高磁珠结合力
简便、快捷
高纯度、高得率、高活率
应用于从白细胞分离、PBMC或细胞培养中阳性选择或去除CD4+ T细胞。分离的CD4+ T细胞可用于培养和扩增、流式细胞术、T细胞功能检测等。
产品信息
操作步骤
1. 材料准备
1.1 分选缓冲液（PBS溶液，pH7.2，0.5%BSA and 2 mM EDTA）
1.2 缓冲液
1.3 分离柱
1.4 分选磁铁
2. 样本制备
当使用抗凝外周血时，应采用密度梯度离心法进行分离，并使用分离缓冲液洗涤以去除干扰因子。
当使用冷冻的PBMC时，复苏冷冻的PBMC，然后继续执行本方案。当发现死亡细胞相当多时，应用密度梯度离心法去除死亡细胞，或在培养基中培养细胞过夜，然后继续执行本方案。
详细操作步骤请参考对应的产品说明书。
3. 磁性标记
3.1 将所需数量的细胞转移到一个新的试管中。
3.2 细胞计数.
3.3 单细胞悬液、300g、10min离心，弃上清。
3.4 在每10⁷总细胞在80µL缓冲液中重悬单细胞悬液。
注意：需要考虑死体积，如死体积已足80uL则不需要加缓冲液。
3.5 每10⁷总细胞加入20µL CD4磁性微球。
3.6 混匀单细胞悬液和磁珠，在冰箱中孵育30分钟(2-8°C)。
注意：如需要鉴定纯度、可在这个步骤完成以后进行鉴定抗体孵育。
3.7 洗涤，每10⁷细胞加入1-2mL缓冲液清洗细胞，300×g离心10分钟。弃上清。
3.8 使用分选缓冲液，重悬单细胞悬液在500uL体系。
4. 分选柱准备
4.1 取一根未开发的分选柱至于对应配套的磁铁中。
4.2 取1mL分选缓冲液缓慢加入分选柱中，润湿分选柱内部，期间避免气泡产生和进入分选柱内部，直至分选柱后一滴液体流出。
4.3 在分选柱下放防置新的试管，取操作步骤3，准备的单细胞悬液，缓慢加入单细胞悬液于分选柱内，等待单细胞悬液后一滴流出。
4.4 原操作步骤4.3单细胞悬液的试管加入3mL分选缓冲液，并充分混匀，然后加入分选柱内，直至后一滴流出。
4.5 重复操作4.4，三次每次3mL。
4.6 后加入5mL分选缓冲液于分选柱内，取出分选柱使用分选柱配套的活塞推出分选柱内目的细胞于新的试管里面。
4.7 根据下游应用对应处理。如需鉴定纯度需尽快完成。
保存方法
保存于2-8°C。不可冷冻储存。可稳定保存至标签上的有效期(EXP.)。
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