检测原理
此定量检测牛血清白蛋白(BSA)酶联免疫试剂盒,采用抗BSA 的单克隆配对抗体,分别作为包被抗体和检测抗体,组成双抗体夹心ELISA检测试剂盒,并与美国标准局的BSA标准品为参照标准,本试剂盒低可检测到1ng/mL的BSA。
试剂盒组分
序号 | 试剂盒组分 | 规格 | 保存温度 |
1 | 抗 BSA 单克隆抗体包被的96孔板条 | 1块 | 4℃ |
2 | BSA 标准品:32ng/mL、16ng/mL、8ng/mL、4ng/mL、2ng/mL、1ng/mL、0ng/mL | 各1瓶(0.4mL/瓶) | -20℃ |
3 | BSA 内部参比(20ng/mL) | 1瓶(0.4mL/瓶) | -20℃ |
4 | TMB 底物显色液 | 1套(A和 B各 6.5mL) | 4℃ |
5 | 显色底物终止液(2N,H2SO4) | 1 瓶 (13mL) | 4℃ |
6 | 样品稀释液 | 1 瓶(13mL) | 4℃ |
7 | 洗涤液(10倍浓缩) | 1 瓶(50mL) | 4℃ |
8 | 使用说明书 | 1份 | 4℃ |
9 | 酶标记抗 BSA抗体 | 1 瓶 (0.13mL) | -20℃ |
10 | 酶标记抗体稀释液 | 1瓶(13mL) | 4℃ |
操作步骤
1、将浓缩洗涤液用蒸馏水做10倍稀释。
2、取出包被有抗BSA的 96孔酶标板在室温放置回温。标准品各浓度做平行两孔,50uL/孔加入酶标板中。加待检样品、内部参比,各两孔,50μL/孔。然后将酶标记抗体用酶标抗体稀释液做1:100 稀释,加入各反应孔,100μL/孔(酶标记抗体用多少稀释多少,现用现配)。加样过程须在15分钟内完成。
3、置室温20~24℃避光反应1小时,用洗涤液洗涤四遍,拍干。
4、用移液器加 TMB 底物显色液100μL/孔,请勿震荡,室温20~24℃避光反应10 分钟。
5、用移液器加终止液100uL/孔,稍微震荡5s 混匀。
6、在酶标仪 450nm 波长处读数。
产品特性
【检测限和定量限】
检测限:零浓度标准品加上两倍的标准差(20个零孔计算值),本试剂盒检测限计算为0.2ng/mL(ppb)。定量限为标准曲线检测下限,1ng/mL。
【准确度和精密度】
计算批内批间变异系数,在高中低三个浓度(20、10、5)下五个重复检测计算批内变异系数,不同时间重复三次计算批间变异系数,CV%均小于10%。
【特异性】
本试剂盒对人血白蛋白,小鼠血清,兔血清,鱼明胶没有交叉反应,而对山羊血清有10%的交叉反应(以相同 OD 值时 BSA和山羊血清的浓度的比值的百分数为准)。
注意事项
1、如样品中 BSA含量高于32ng/mL,可将样品做适当稀释。
2、样品如为冻干制剂,应用样品稀释液充分溶解混匀。
3、反应时应将整板放入洁净的密闭空间中,为防止反应孔中落入异物。
4、洗涤拍干后,应消除各孔内残余的气泡。
5、开封后,将未使用的板条放回加入干燥剂的密封塑料袋中,置4℃密闭保存。
6、在操作过程中,所使用的移液器吸头、洗涤机(瓶)、器皿等均应严格避免被有BSA 的环境和物品污染。
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