活死细胞染色试剂
91-06-0017
产品简介
本产品含有Calcein-AM和PI两种组分。Calcein-AM是一种对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂，其荧光呈绿色（Ex=490nm，Em=515nm）。因其在传统的Calcein（钙黄绿素）基础上引入乙酰甲氧基甲酯（AM）基团，增加了疏水性，使其能够轻易穿透活细胞膜。一旦进入细胞后，Calcein-AM（本身不发荧光）被细胞内的酯酶剪切形成膜非渗透性的极性分子Calcein，从而被滞留在细胞内并发出强绿色荧光。由于死细胞缺乏酯酶，Calcein-AM仅用于对活细胞的细胞生存能力测试和短期标记。因此，Calcein-AM常常与死细胞荧光探针如碘化丙啶（PI）等联合使用，同时进行活细胞和死细胞的荧光双重染色。碘化丙啶（Propidiumiodide，PI）不能穿过活细胞的细胞膜，仅能穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核，并嵌入细胞的DNA双螺旋从而产生红色荧光（Ex=535nm，Em=615nm），因此PI仅对死细胞染色。
本产品中Calcein-AM浓度为：1mM，建议工作浓度1~10µM；PI浓度为：1mM，建议工作浓度1~10µM。
产品信息
产品编号 | 产品名称 | 包装规格 |
91-06-0017 | 活死细胞染色试剂 | 500T |
保存方式
-20℃保存，一年有效。
操作方法
1.Calcein-AM/PI工作液配制：（建议Calcein-AM：2μM，PI：4μM，染色效果不佳，可以适当增加浓度）分别取10µl的Calcein-AM和20µl的PI储存溶液，加入至5ml的PBS中，充分混匀，备用；
注意：由于Calcein-AM的稳定性比较差，此染色工作液必须现配现用，并且在当天用完。
Calcein-AM和PI的佳浓度是因不同的细胞种类而定，初次实验建议做梯度实验，以确定Calcein-AM和PI的适浓度。
2.染色前先用PBS洗涤细胞两次；
3.加入适量的Calcein-AM/PI工作液（贴壁细胞覆盖即可），在培养箱中孵育15-30min；
4.用PBS或适当的缓冲液洗涤细胞两次；
5.荧光显微镜下观察细胞染色结果，Calcein-AM检测波长：Ex=490nm（蓝光激发）,Em=515nm；PI检测波长：Ex=535nm（绿光激发）,Em=615nm。
注意事项
1.使用前先将低温保存的试剂在室温条件下放置20-30min，
2.使用前请低速离心，保证试剂沉降于管底。
3.由于Calcein-AM对湿度非常敏感，工作液必须现配现用。
4.初次实验建议做梯度实验，以确定Calcein-AM和PI的适浓度，浓度过高可能会产品假阳性。
5.使用共聚焦荧光显微镜观察效果更佳。
6.次使用可对储存液进行分装，以减少反复冻融次数。
7.血清的存在可能会干扰Calcein-AM染色，染色前请先用PBS洗涤细胞。
8.碘化丙啶（PI）有一定的致癌性，操作时一定要注意防护。若接触到皮肤，需要立即用自来水清洗。
9.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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