Human T-Activator CD3/CD28磁珠（91-01-0020）
91-01-0020
产品描述
Human T-Activator CD3/CD28磁珠提供了一种不需要抗原呈递细胞和抗原就能激活和扩增调节T细胞的简单的方法。通过在磁珠上偶联抗CD3和抗CD28单克隆抗体，就能提供调节T细胞激活和扩增需要的初级和协同刺激信号。
Human T-Activator CD3/CD28适用于人T细胞的分离、激活和扩增，可用于CAR-T等多种T细胞培养技术的应用。
产品信息
货号 | 91-01-0020 | 适用范围 | T淋巴细胞 |
浓度 | 2×108beads/mL | 反应种属 | 人 |
含量 | 1mL | 保存温度 | 2~8℃ |
内毒素 | <2EU/mL | 有效期 | 24个月 |
使用方法
1.Human T-Activator CD3/CD28磁珠的清洗
（1）在离心管里重悬磁珠（涡旋超过30s，或者颠倒混匀5min）。
（2）将确定体积的磁珠转移到离心管中。
（3）加入等体积的PBS缓冲液(含1%HSA)，若磁珠体积低于1mL，则加入1mL PBS缓冲液(含1%HSA)，进行重悬。
（4）把离心管放在磁力架（磁珠专用）上1min，随后弃去上清；
（5）将离心管从磁力架（磁珠专用）上转移下来，用相同体积的PBS缓冲液(含1%HSA)重悬磁珠（第2步初体积的磁珠）。
2.磁珠分离和扩增CD3+的T细胞
（1）对于Ficoll分离的PBMC，将细胞轻柔地重悬于PBS缓冲液(含1%HSA)中，并调节细胞密度为2~5×107个/mL。（此处注意，总的细胞数量不要超过2×108个。）
（2）将磁珠和细胞按照3:1的比例混合(如果需要活化的细胞是纯T细胞，那么磁珠与细胞的比例调整为1:1)。
（3）将样品置于转速100~200rpm/min的摇床上，在4℃~25℃条件下孵育30min，在每次的试验中需要在4℃~25℃范围内优化适的孵育条件。
（4）用无血清培养基或者PBS缓冲液(含1%HSA)稀释磁珠和细胞的混合物，来保证磁力架（磁珠专用）的分选体积。同时将离心管放在磁力架（磁珠专用）上1~2min。
（5）弃上清，将含有1000 IU/mL IL-2的完全培养基重悬磁珠和细胞的混合物，并调整细胞密度为0.5×106个/mL~1×106个/mL。
（6）将细胞悬液置于培养容器中，调节细胞密度为0.5~1×106/mL，随后将培养容器置于37℃，5%CO2的培养箱中，培养7天。
3.细胞计数和培养体系的扩增：
（1）细胞扩增后期，定期轻轻地吹打培养容器中的细胞悬液，以便将磁珠和细胞分离。吹打过程要确保能够分散所有可见的磁珠与细胞的混合物。
（2）当CD3+ T＞1×106个/mL，补加含有IL-2的T细胞完全培养基稀释细胞，调整细胞密度大约为0.5×105个/mL。
（3）在培养的后几天（9~14天），进行细胞计数，并用磁铁或磁力架去除磁珠。
注意事项
1.由于单核细胞在37℃能够快速的吞噬磁珠，因此就降低了所能够接触到T细胞磁珠的绝对数量，进而降低了T细胞活化和扩增能力。
2.培养过程中，可以每天都进行细胞计数。同时通过流式细胞术对T细胞的纯度、表型、活化状态进行追踪。同时，收集培养上清进一步对T细胞活化状态进行细胞因子分泌的检测。
3.若需要转染，一般在细胞活化的第3~4天，细胞活率高于90%再进行转染。
运输与保存
蓝冰运输，4℃保存。
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