CD4+记忆T细胞分选试剂盒，人(92-01-0268)
92-01-0268
产品信息
[组分]
1mL 记忆CD4+T细胞生物素-抗体混合物，人:偶联CD8，CD14,CD16，CD19，CD36，CD45RA，CD56，CD123，T细胞受体v/8和糖蛋白A抗体的生物素混合物。
2mL 抗生物素磁珠:与抗生物素偶联的磁珠。
[规格]
可分选109总细胞数，总计100次分选。
[保存形式]
所有组分均保存在含有稳定剂和0.05%叠氮钠的溶液中。
储存条件
在2-8℃条件下避光保存，请勿冷冻。有效期见试剂外标签。
使用方法
[试剂和设备]
缓冲液:含有pH7.2、0.5%BSA和2mMEDTA的溶液。
选择合适的分选柱和分选器，也可以使用自动分选器进行操作。
(可选)预分离过滤器用于去除细胞团块。
(可选)用于流式细胞术分析的荧光标记抗体。
(可选)碘化丙啶溶液或7-AAD用于流式细胞术排除死亡细胞。
操作步骤
[1.样本制备]
使用标准方法从淋巴器官、非淋巴组织或外周血中制备单细胞悬浮液。
▲注:死亡细胞可能非特异性地结合到磁珠上。要去除死细胞，我们建议使用密度梯度离心法或死细胞去除试剂盒。
[2.磁性标记]
▲过程操作速度要快，试剂需提前预冷。可以减少非特异性细胞标记。
▲磁性标记的体积多可达107个细胞。少于107个细胞时，请使用标示的相同体积。当处理更多的细胞时，相应地放大所有试剂体积(例如，对于2X107个总细胞，使用标示试剂体积的两倍)。
▲为了获得佳性能，在磁分选之前获得单细胞悬液是很重要的。通过预分离过滤器去除可能堵塞分选柱的细胞团块。
1.细胞计数。
2.淋巴细胞离心，300g，10min，去除上清。
3.每107细胞，用40μL缓冲液重悬。
4.每107细胞，用10μL生物素抗体混合物混匀。
5.4℃冰箱避光孵育10min(如果是在冰上孵育，需要增加孵育时间;如果是常温孵育，会增加非特异结合)。
6.每107细胞，加入30μL缓冲液。
7.每107细胞，加入20μL抗生物素磁珠。
8.混合均匀，在冰箱(2-8℃)中孵育15分钟。
9.每107细胞加入1-2mL缓冲液洗涤细胞，300Xg离心10分钟。完全吸去上清液。
10.加500μL缓冲液重悬细胞。
[3.磁性分选]
根据总细胞数和标记细胞数选择合适的分选柱和分选器。
1.将分选柱放置在分选器的磁场中。
2.将LS分选柱中加入3mL缓冲液，充分湿润分选柱:
3.将细胞悬液加到分选柱中。
4.结合磁珠的细胞会被吸附到分选柱上，没有结合的细胞会顺着液体流下来。加3mL缓冲液，待液体全部流尽，再加入适量缓冲液，一共洗3次。收集总流出物。这是未标记的CD4+记忆T细胞。
5.(可选)将分选柱从分选器中取出，并将其放在合适的收集管上。将5mL缓冲液移液到分选柱上。通过将柱塞牢牢地推入柱中，立即将带有磁性标签的细胞冲洗出来。这部分代表磁性标记的非CD4+T细胞和naïve CD4+T细胞。
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