CD8a+T细胞分选试剂盒，小鼠(92-01-0160)
92-01-0160
产品信息
[组分]
1mL CD8a+T细胞生物素-抗体混合物，小鼠:CD4，CD11b，CD11c，CD19，CD45R(B220),
CD49b(DX5)，CD105，MHCI类，Ter-119和TcRy/8单抗偶联生物素的混合物。
2mL 抗生物素磁珠:与抗生物素单抗偶联的磁珠(同型:小鼠IgG1)。
[规格]
可分选109总细胞数。
[保存形式]
所有组分均保存在含有稳定剂和0.05%叠氮钠的溶液中。
储存条件
在2-8℃条件下避光保存，请勿冷冻。有效期见试剂外标签。
使用方法
[试剂和设备]
缓冲液:含有pH7.2、0.5%BSA和2mM EDTA的溶液。
选择合适的分选柱和分选器，也可以使用自动分选器进行操作。
(可选)预分离过滤器用于去除细胞团块。
操作步骤
[1.自动分选仪磁性标记、分选]
▲如何使用自动分选仪，请参阅用户手册。
▲所有缓冲温度应为≥10℃。
▲将试管放置在以下位置:位置A=样品，位置B=阴性部分，位置C=阳性标记部分。
1.细胞计数。
2.打开仪器，进行自动初始化。
3.转到试剂菜单并选择读取试剂。用自动分选仪上的条形码扫描仪扫描每个试剂的条形码。将试剂放入试剂架上的适当位置。
4.将样品和采集管放入冷藏架。
5.点击分选菜单，从标签子菜单中选择每个样品的名称(将自动选择正确的标记、分选和洗涤方案)。
6.将样本体积输入到体积子菜单中。按Enter键。
7.选择运行。
8.在位置 B收集浓缩的CD8a+T细胞部分是目的细胞。
[2.手动磁性标记]
过程操作速度要快，试剂需提前预冷。可以减少非特异性细胞标记。
▲磁性标记的体积多可达107个细胞。少于107个细胞时，请使用标示的相同体积。当处理更多的细胞时，相应地放大所有试剂体积。
▲为了获得佳性能，在磁分选之前获得单细胞悬浮液是很重要的。通过预分离过滤器去除可能堵塞分选柱的细胞团块。
1.准备细胞，并进行细胞计数。
2.每 107细胞，用40μL缓冲液重悬。
3.每107细胞加 10μL的生物素-抗体混合物。
4.混合均匀，在冰箱(2-8℃)孵育5分钟。
5.每 107总细胞加30μL缓冲液。
6..每107细胞加 20μL的磁珠混合物。
7.混合均匀，在冰箱(2-8℃)孵育10分钟。
8.继续进行后续的磁性分选。
▲注:磁性分选要求少体积500μL。如有必要，在细胞悬液中加入缓冲液。
[3.手动磁性分选]
▲始终等到分选柱储液器排空后再进行下一步操作。
9.将xL柱置于合适的分选器磁场中。
10.用 3mL 缓冲液冲洗分选柱。
11.将细胞悬液转移到柱子上。收集通过的未标记细胞，代表富集的CD8a+T细胞。
12.用 3mL缓冲液清洗分选柱。收集通过的未标记细胞，代表富集的CD8a+T细胞，并与步骤11的流出物合并。
13.(可选)将分选柱从分选器上取出，并将其放在合适的收集管上。将5mL缓冲液加到分选柱上。将柱塞快速地推入柱中，立即冲洗出磁性标记的非CD8a+T细胞。
[4.自动磁性分选]
▲如何使用自动分选仪，请参阅用户手册。
▲所有缓冲温度应为≥10°C。
▲将试管放置在以下位置:位置A=样品，位置B=阴性部分，位置C=阳性标记部分。
9.仪器做好准备。
10.仪器按照用户手册中的说明进行操作。
11.建议使用Depletes程序。在B位收集富集的CD8a+T细胞就是阴选部分。
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