产品信息
[组分]
1mL FcR阻断剂:人Ig。
1mL 人Pan单核细胞生物素抗体混合物:针对在人单核细胞上未表达抗原的生物素抗体混合物。
2mL 抗生物素磁珠:与抗生物素抗体偶联的磁珠(同种型:小鼠IgG1)
[规格]
可分选109个细胞总量。
[保存形式]
所有组分均储存在含有稳定剂和0.05%叠氮化钠的缓冲液中。
使用方法
试剂和仪器要求
●缓冲液:配制含有pH7.2 PBS、0.5%牛血清白蛋白(BSA)和2mM EDTA的溶液。使用前对缓冲液进行脱气处理,因为空气气泡可能会堵塞分选柱。
●分选柱和分离器。
●(可选)预分离过滤器去除细胞团块。
操作步骤
一、磁珠标记
1.细胞计数。
2.每107个细胞总量使用30μL缓冲液重悬。
3.每107个细胞总量添加10μL FcR阻断剂。
4.每107个细胞总量添加10μL生物素抗体混合物。
5.混匀,2−8°C孵育5分钟。
6.每107个细胞总量添加30μL缓冲液。
7.每107个细胞加入20μL抗生物素磁珠。
8.混匀,2-8℃孵育10分钟。
9.进行细胞分选步骤。
二、细胞分选
10.将分选柱置于相对应的分选器中。
11.用适当体积的缓冲液润洗分选柱(xM:500μL;xL:3mL)
12.将细胞悬液转移至分选柱中,收集流出的未标记细胞,代表富集的单核细胞。
13.用适当体积的缓冲液冲洗分选柱。收集流下来的未标记的细胞与第12步的收集物放在一起,代表富集的单核细胞。(xM:3×500μL;xL:3×3mL)
14.(可选)将分选柱从分选器中取出,并将其放在合适的收集管上。将适量的缓冲液加入分选柱,将柱塞用力推下,立即冲洗出磁性标记的非单核细胞。(xM:1mL;xL:5mL)
储存条件
2-8°C避光保存,请勿冷冻。有效期见试剂外标签。
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