抗APC分选磁珠(92-01-0056)
92-01-0056
分选原理
首先，用APC偶联的一抗或其配体对细胞进行染色。随后，用抗APC磁珠对细胞进行磁性标记。然后将细胞悬液加到分选柱上，该分选柱置于分选器的磁场中。磁性标记的细胞保留在柱中，而未标记的细胞则通过分选柱流出。将分选柱从磁场中移开后，磁性标记的细胞可以作为正选细胞被洗脱下来。
产品信息
[组分]
2 mL抗APC磁珠:与单克隆小鼠抗APC抗体(同种型:小鼠IgG1)偶联的磁珠。
[规格]
2mL，可分选109总细胞数，多达100次分选。
[保存形式]
保存在含有稳定剂和0.05%叠氮钠的溶液中。
使用方法
[试剂和设备]
缓冲液:含有pH7.2、0.5%BSA和 2mM EDTA的溶液。保持缓冲液冷却状态(2-8℃)。
分选柱和分选器:抗APC磁珠标记的细胞可通过xM、xL 柱(阳性选择)进行富集。也可以使用自动分选器进行阳性选择。
APC偶联的一抗或配体。
(可选)PI(碘化丙啶)或7-AAD用于流式细胞术排除死亡细胞。
(可选)预分离过滤器用于去除细胞团块。
(可选)死细胞去除试剂盒，用于去除死细胞。
[1.样本制备]
当使用抗凝外周血或白膜层时，应通过密度梯度离心分离外周血单个核细胞(PBMC)。
当处理组织或溶解的血液时，使用标准方法制备单细胞悬浮液。
[2.磁性标记]
1.细胞计数。
2.300Xg离心10分钟，去除上清。
3.根据说明书建议重悬细胞沉淀并用APC偶联一抗进行染色。
4.充分混合并在冰箱(2-8°C)中避光孵育10分钟或按照说明书的建议进行。
5.每 107细胞添加1-2mL缓冲液，洗涤细胞以去除未结合的一抗，并以300Xg离心10分钟。
6.(可选)重复清洗步骤。
7.完全吸出上清液，每107个总细胞加80μL缓冲液重悬细胞沉淀。
8.每107总细胞添加20μL抗APC磁珠。
9.充分混合并在冰箱(2-8℃)中孵育15 分钟。
10.每 107细胞添加1-2mL缓冲液洗涤细胞，并以300Xg离心10分钟。
11.完全吸出上清液。
12.加500μL缓冲液中重悬细胞，多重悬108细胞。
13.进行磁分选。
[3.磁性分选]
根据总细胞数和标记细胞数选择合适的分选柱和分选器。
1.将分选柱放置在分选器的磁场中。
2.将分选柱中加入适量缓冲液，充分湿润分选柱（xM: 500μL；L: 3 mL）
3.将细胞悬液加到分选柱中。
4.结合磁珠的细胞会被吸附到分选柱上，没有结合的细胞会顺着液体流下来。加适量的缓冲液，待液体全部流尽，再加入适量缓冲液，一共洗3次。收集总流出物。这是未标记的细胞。（xM:3X500μL；L:3x3mL）
5.将分选柱从分选器中取出，并将其放在合适的收集管上。
6.加适量的缓冲液到分选柱中，迅速用塞子推下，得到就是磁性标记的细胞。（xM:1mL；L: 5 mL）
储存条件
在2-8℃条件下避光保存，请勿冻存。有效期见瓶子外标签。
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