TCRγ/δ+T细胞分选试剂盒，小鼠(92-01-0081)
92-01-0081
产品信息
[组分]
1mL 非T细胞去除试剂混合物，小鼠:与小鼠CD45R(B220;同种型:大鼠IgG2a)和CD11b(Mac-la-链;同种型:大鼠IgG2b)的单克隆抗体偶联的磁珠以及生物素偶联的小鼠TCRγ/δ的单克隆抗体(同种型:仓鼠IgG2)混合物。
1mL 抗生物素磁珠:与抗生物素单抗偶联的磁珠(同型:小鼠IgG1)。
[规格]
可分选 2x109总细胞数。
[保存形式]
去除试剂混合物保存在含有稳定剂和0.05%叠氮钠的溶液中。
抗生物素磁珠保存在0.05%叠氮钠的溶液中。
使用方法
[试剂和设备]
缓冲液:含有pH7.2、0.5%BSA和 2mM EDTA的溶液。不建议使用含有钙离子或镁离子的缓冲液。
选择合适的分选柱和分选器，在LD 柱上去除非TCRγ/δ+T细胞，随后在两个xM柱上进行TCRγ/δ+T 细胞的阳性选择，也可以使用自动分选器进行操作。
(可选)预分离过滤器用于去除细胞团块。
(可选)用于流式细胞术分析的荧光标记抗体。
(可选)碘化丙啶溶液或7-AAD 用于流式细胞术排除死亡细胞。
[1.样本制备]
使用标准方法从淋巴器官制备单细胞悬浮液。
[2.磁性标记非T细胞]
1.白细胞计数。
2.离心，300g，10min，去除上清。
3.每108细胞，用450μL缓冲液重悬。
4.每108细胞，用50μL非T细胞去除试剂混合物(小鼠)混匀。
5.2-8℃冰箱避光孵育15min(如果是在冰上孵育，需要增加孵育时间;如果是常温孵育，会增加非特异结合)。
6.添加10-20倍标记体积的缓冲液洗涤细胞，300×g离心10分钟。完全吸去上清液。
7.加 500μl缓冲液重悬细胞。
8.进行磁分选。
[3.磁性分选去除非T细胞]
[使用自动分选器去除]
1.准备并启动自动分选器。
2.将含有磁性标记细胞的试管放入自动分选器中。选择分选程序“Depl05”。
3.收集未标记的细胞(出口端口“neg1”)。这是预富集的T细胞部分。
4.继续分选TCRγ/δ+T细胞。
[4.TCRγ/δ+T 细胞的磁性标记]
1.离心，300g，10min，去除上清。
2.每 108细胞，用450μL 缓冲液重悬。
3.每 108细胞，用50μL抗生物素磁珠混匀。
4.2-8℃冰箱避光孵育15min(如果是在冰上孵育，需要增加孵育时间;如果是常温孵育，会增加非特异结合)。
5.添加 10-20倍标记体积的缓冲液洗涤细胞，300×g离心10分钟。完全吸去上清液。
6.加 500ul缓冲液重悬细胞。
7.进行磁分选。
[5.磁性分选TCRγ/δ+T细胞]
1.将xM分选柱放置在分选器的磁场中。
2.在分选柱中加入500μL缓冲液，充分湿润分选柱:
3.将细胞悬液加到分选柱中。
4.结合磁珠的细胞会被吸附到分选柱上，没有结合的细胞会顺着液体流下来。加500μL缓冲液，待液体全部流尽，再加入适量缓冲液，一共洗3次。
5.从分选器中取出色谱柱并将其放置在合适的收集管上。
6.加1mL缓冲液在分选柱上。用力推动的柱塞，立即冲洗带有磁性标记的TCRγ/δ+T细胞的部分。
7.使用新分选柱重复步骤1至6中所述的磁力分选程序。
储存条件
在2-8℃条件下避光保存，请勿冻存。有效期见试剂外标签。
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